一、产品名称

单纯疱疹病毒（HSV）1+2型抗体检测试剂盒（酶联免疫吸附法）

二、用途

本试剂盒用于定性检测人血清或血浆样本中的抗单纯疱疹病毒1型和2型（HSV-1 & HSV-2）的IgG抗体和/或IgM抗体。

三、检测原理

采用间接酶联免疫吸附法（Indirect ELISA）。

• 包被：微孔板条上预包被了纯化的HSV-1特异性抗原和HSV-2特异性抗原。
• 次孵育：将稀释后的患者样本加入孔中。如果样本中存在HSV特异性抗体（IgG或IgM），则会与微孔中的抗原结合。
• 洗涤：洗去未结合的其他成分。
• 次孵育：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人IgG抗体或抗人IgM抗体（酶标二抗）。二抗会与 步中结合在板上的抗体特异性结合。
• 再次洗涤： 洗去未结合的酶标二抗。
• 显色：加入显色底物液（TMB）。酶催化底物发生反应，产生蓝色。
• 终止：加入终止液，反应停止，蓝色变为黄色。
• 检测：用酶标仪在450nm波长（参比波长630nm）下测定各孔的吸光度（OD值）。
• 结果判定：样本的OD值与临界值（Cut-off值）比较，判断阳性或阴性。

四、试剂盒组成

• 预包被微孔板： 12条×8孔，可拆卸。
• 阴性对照血清： 1瓶。
• 阳性对照血清： 通常包含HSV-1 IgG阳性对照、HSV-2 IgG阳性对照、IgM阳性对照等。
• 酶标二抗 （抗人-IgG/HRP 或 抗人-IgM/HRP）： 1瓶。
• 样本稀释液： 1瓶。
• 浓缩洗涤液（20×或25×）： 1瓶，使用前需用蒸馏水或去离子水稀释。
• 显色底物液（TMB A液和B液）： 各1瓶。
• 终止液（通常为稀硫酸）： 1瓶。
• 封板膜： 若干。
• 说明书： 1份。

五、样本要求

样本类型：血清或血浆。

采集与处理：按标准静脉采血程序操作，离心分离血清或血浆，避免溶血、脂血或污染。

保存：短期（7天内）可存放于2-8°C；长期保存应置于-20°C或以下，避免反复冻融。检测前应将样本恢复至室温并混匀。

六、操作步骤

• 准备工作：将试剂和样本恢复至室温（约30分钟）。配制好工作浓度的洗涤液。
• 编号：设定空白孔、阴性对照孔、阳性对照孔和样本孔。
• 加样：在相应孔中加入100μL已稀释的阴性对照、阳性对照和样本。
• 空白孔：只加样本稀释液或空气。
• 孵育：盖上封板膜，37°C孵育一定时间（如60分钟）。
• 洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满每孔，静置30秒后甩干，重复洗涤5次， 在吸水纸上拍干。
• 加酶标二抗：每孔加入100μL酶标二抗（抗人-IgG或抗人-IgM）。
• 孵育：盖上封板膜，37°C孵育一定时间（如30分钟）。
• 洗涤：重复步骤5的洗涤过程。
• 显色：每孔依次加入TMB A液和B液各50μL，轻轻混匀，37°C避光孵育10-30分钟。
• 终止：每孔加入50μL终止液，轻轻混匀，蓝色立即变为黄色。
• 读数：在加入终止液后15分钟内，用酶标仪于450nm波长下测量各孔的OD值。

七、结果计算与判定

有效性判定：

• 阴性对照平均OD值应 < 0.10（或说明书指定值）。
• 阳性对照平均OD值应 ≥ 临界值（Cut-off值）。
• 如不符合，则试验无效，需重做。

临界值（Cut-off Value）计算：

通常为 阴性对照平均OD值 + 0.15（或按说明书给出的特定公式计算，例如：灰区设定为Cut-off值±10%）。

结果判定：

• 阳性（Positive）： 样本OD值 ≥ Cut-off值。
• 阴性（Negative）： 样本OD值 < Cut-off值。
• 临界（Gray Zone）： 样本OD值在Cut-off值±10%范围内。建议2-4周后复查样本或使用其他方法（如Western Blot）确认。

八、性能指标

1. 灵敏度： >99%
2. 特异性： >99%（与其它疱疹病毒交叉反应率低）
3. 精密度： 板内、板间变异系数（CV）< 10%

九、注意事项

仅供科研使用。

• 所有试剂和样本都应按潜在的生物危险品处理。
• 不同批次的试剂组分不得混用。
• 严格遵守操作时间和温度。
• 洗涤不 是导致结果不可靠的主要原因，务必确保洗涤充分。
• 终止液有腐蚀性，避免接触皮肤和衣物。

十、储存及有效期

储存条件： 2-8°C 避光保存。

有效期： 通常为12个月。

稳定性： 开封后的微孔板条应放入带有干燥剂的密封袋中保存。

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