基于间接免疫荧光法（IFA），试剂盒内预包被肺.炎支原体抗原的载玻片与待测血清中特异性IgM抗体结合，再加入荧光标记的抗人IgM二抗（如FITC标记），通过荧光显微镜观察抗原-抗体复合物的荧光信号，判断样本中肺.炎支原体IgM抗体是否存在。

样本要求

样本类型：血清或血浆（无菌采集，避免溶血、脂血或微生物污染）。

保存条件：短期（≤7天）：2~8℃冷藏；长期：-20℃冷冻保存，避免反复冻融。

操作步骤

样本处理：离心去除颗粒物（若样本浑浊），取上清液备用。

吸附剂处理：加入抗IgG吸附剂去除类风 湿因子（RF）干扰（若试剂盒含此组分）。

抗原孵育：将稀释后的血清样本滴加至抗原载玻片孔中，37℃避光孵育30分钟。

洗涤：用PBS缓冲液冲洗3次，去除未结合抗体。

二抗孵育：加入荧光标记抗人IgM抗体，37℃避光孵育30分钟，再次洗涤。

封片观察：滴加缓冲甘油封片，荧光显微镜下观察（激发波长490nm，发射波长520nm）。

结果判读

阳性：细胞或抗原固定区域显示清晰绿色荧光（亮度≥阳性对照）。

阴性：无荧光或荧光强度显著低于阳性对照。