科研地塞米松检测试剂盒使用说明书

检测原理及用途

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测肌肉组织、牛奶等样品中的地塞米松（Dexamethasone，DEX），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的地塞米松药物和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗地塞米松药物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含地塞米松药物含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中地塞米松药物的残留量。

 肌肉组织样本处理方法 

1）称取均质后的样本2±0.05g于50ml离心管中，加入8ml乙酸乙酯，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取上层液体4ml至50ml离心管中，加入4ml 2M 氢氧化钠溶液，振荡5min，室温4000转/分离心10分钟；

3）取2ml上层有机相至10ml洁净干燥玻璃试管中，在50-60℃下氮气吹干；

4）加入1ml复溶液溶解干燥的残渣，振荡2min；

5）取100μl进行分析。

    样本稀释倍数：2    检测下限：0.2ppb

5.3.2 牛奶样本处理方法

1）取200ul牛奶样本，加入0.8ml复溶液工作液充分混匀；

2）取100μl进行分析

样本稀释倍数：5    检测下限：0.5ppb

饲料样本处理方法 

1）称取碾碎后的饲料样本1±0.05g于50ml离心管中，加入4ml 0.3M 氢氧化钠溶液，振荡混匀，再加入8ml乙酸乙酯，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取1ml上层有机相至10ml洁净干燥玻璃试管中，在50-60℃下氮气吹干；

3）加入1ml正己烷溶解干燥的残渣，再加1ml复溶液，振荡2min；

4）室温4000转/分离心5分钟；

5）去上层，取下层水相100μl进行分析。

样本稀释倍数：8    检测下限：1ppb

酶联免疫试验步骤

将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

2 加样反应：加标准品或样本100μl/孔到各自的微孔中，然后加抗体工作液50μl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光反应30分钟。

3 洗    涤：将孔内液体甩干，用工作洗涤液250μl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，*用吸水纸拍干（拍干后未被清除气泡可用干净的枪头刺破）。

 加酶反应：加酶标记物100μl/孔，25℃避光反应30分钟。

5 洗    涤：同上

6 显    色：加底物液A 50μl/孔，再加底物液B 50μl/孔，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟（若蓝色过浅，可适当延长反应时间）。

7 终    止：每孔加入终止液50μl，轻轻振荡混匀，终止反应。

8 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。

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