健仑血液DNA提取试剂盒（快速型）

产品特点：

Blood Genomic DNA Extraction Kit 采用独特的疏水膜技术，彻底去除全血中蛋白和大部分 RNA 等各种干扰物，提取高纯度的 DNA。试剂盒采用独特的缓冲统，适用于多种不同类型的血液，同样适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和其它无细胞体液中提取病毒 DNA。

注意事项：

1. 实验前准备工作：详细阅读该手册熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分、1.5 ml 和 2 ml 灭菌离心管、以及 37 ℃和 65 ℃的温浴条件。

2. KBL1 和 KW1 在低温时可能产生混浊或沉淀，在 37-65 ℃温浴片刻即可。

3. Buffer KW 第一次使用前请按瓶上标签加入 50 ml 无水或 95%乙醇， 并常温保存。每次使用后，请立即拧紧盖子。

操作步骤：

（一）平衡吸附柱

1. 取一 Mini Column 柱装在一个 2 ml 收集管上（已备）。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子内，室温 13 000 rpm 离心 1 min，使平衡液完全流过柱子。弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。

注意：柱子不平衡，将导致 DNA 产率减少。

（二）样品处理

2. （1）按 100 μl 全血（适合各种抗凝剂，EDTA 较好）加入 100 μl 等体积的 KTL1，混匀，37℃温浴 5min。

(2) 加入 1000 μl KBL1，混匀 1min。

注意： 取样*体积因物种不同有所差异。人血以 100-200 μl 为*，小鼠以 50-100 μl 为*。且当全血体积大于 200 μl 时，KBL1 体积按比例扩大。

（二）吸附

3. 将混合液转移至已平衡的吸附柱内，室温 13 000 rpm 离心 30 s，使裂解液完全流过柱子。保留柱，弃去收集管中的过滤液，将柱重新放入收集管。

注意：如混合液体积过大，可分数次上柱，每次上样量不要超过 700 μl。

4.（可选）加入 30 μl  浓度为 20-50 μg/ml 的RNase A  于柱的膜上，37 ℃放置 5-10 min。

注意：本试剂盒没有配备 RNase A 溶液。一般来说，这一步没有必要，因为本试剂盒的纯化柱对 RNA 没有吸附能力。如果实验要求不能残留微量RNA，可采用这一步处理。

(三) 漂洗

5. 加入 700 μl Buffer KW1，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。

6. 加入 700 μl Buffer KW，室温 13 000 rpm 以上离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。

注意：Buffer KW 在*使用之前必须加入 50 ml 无水乙醇，并置于室温下保存。

7.（可选） 重复用 700 μl 70%乙醇（室温）洗涤柱子，室温 12 000 rpm离心 1 min。

8. 弃收集管中的滤液，将空柱套回 2 ml 收集管内。室温下，*转速或 13 000 rpm 离心 2 min 以甩干柱子基质残余的液体。

注意：此步骤不可省，否则将导致乙醇残留于 DNA 中，影响后续反应。

(四)洗脱

9. 把柱子装在一个新的 1.5 ml 离心管上，加入 30-50 μl 的 KE（可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或纯水代替，纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0）于膜的中央，65 ℃放置 5-10 min，13 000 rpm 以上离心 1 min 以洗脱 DNA。（也可以将 KE 预热至 65℃，再加至膜上，可以减少放置时间至 1min）

注意：小心加 KE 到柱中吸附膜的中间部位，并确保液体将膜全部覆盖。

10. DNA 可保存于 4 ℃，若长时间保存，可冻存于-20 ℃。

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