李斯特菌分型用免疫血清「生研」

OI/Ⅱ, OI , OⅣ, OV/Ⅵ, OⅥ, OⅦ,  OⅧ, OⅨ

H-A, H-AB, H-C, H-D

【形状·构造等（成套的构成）】

1.李斯特菌分型用免疫血清(O血清) 各2mL×1支

含有关于抗李斯特菌O抗原血清的兔子免疫球蛋白以外的液剂，含有作为保存剂用的0.08w/v％叠氮化钠。

OI/Ⅱ, OI , OⅣ, OV/Ⅵ, OⅥ, OⅦ,  OⅧ, OⅨ

2.李斯特菌分型用免疫血清(H血清) 各5mL×1支

含有关于抗李斯特菌H抗原血清的兔子免疫球蛋白以外的液剂，含有作为保存剂用的0.08w/v％叠氮化钠。

H-A, H-AB, H-C, H-D

【使用目的】

从食品中分离出来的李斯特菌(L.monocytogenes)的血清型的决定。

【测定原理】

本品和含有相应型特异抗原的李斯特菌(L.monocytogenes)混合的时候，由于抗原抗体反应，菌体会凝结成块。用肉眼观察本反应来进行血清分型。

【使用操作上的注意】

1.测定试剂的性质·采集法

1）检体是指：遵从「厚生省主编的 检查微生物必携品」^１）等的方法进行分离，根据生化学的性状测试使用李斯特菌和被鉴定菌株。

2）请确认菌株必须是纯培养，多种菌株混合的话有可能导致判定不准确。

2.妨害物质·妨害试剂

本测试使用到的培养基对试验反应的妨害性还没有得到确认。

3.其它

1）   培养基请务必使用举例说明的培养基那样的非选择性培养基。若用选择培养基的话，由于抗原的产生不充分，容易自我凝结。

2）   用玻片凝结法把试剂和血清混合的时候，请注意不要造成相互污染地在玻片上滴加血清。

3）   H分型试验请用呈活性的菌株。

【用法·用量（操作方法）】

1.        要准备的器具及试剂、培养基

1）小试管（容量5～7mL）

2）移液管（5mL）

3）微量移液管及芯片（5～10μL）

4）台式荧光灯

5）生理盐水

6）孵蛋器（37℃）

7）O分群试验

（1）铂丝或者铂环

（2）玻片

（3）怀特标记等

（4）0.2w/v%氯化钠

（5）BHI琼脂培养基(Brain Heart Infusion Agar)

（6）离心分离机（900×g以上：台式离心机3000rpm以上）

（7）自动高压锅（121℃）

8）H分型试验

（1）恒温水槽

（2）BHI半流动培养基（琼脂浓度为0.2w/v%克雷吉管的注入物）

（3）BHI液体培养基

2.试剂的调制方法

请直接使用本品。

3.操作方法

1）   O抗原的决定

O抗原的决定是使用加热处理菌运用玻片凝集反应进行的。

（1）试剂的调制

在BHI琼脂培养基里培养的被检菌放到0.2w/v%氯化液里，使之浓度变成约10mg/mL进行浮游作为被检菌扩原浓厚的悬浮液。

（2）用混合血清进行凝集反应

①用怀特标记等把干净的玻片分成几个区域，把与混合血清相当的Ⅰ/Ⅱ，Ⅴ/Ⅵ血清和1滴生理盐水（对照）滴加在各区域里。

②把被检菌抗原浓厚的悬浮液在血清及生理盐水上方各滴加1铂丝，用铂丝把抗原和血清，抗原和生理盐水充分搅拌混合。

③把玻片前后倾斜，用肉眼观察判定有没有凝集。

1分钟内在透明的前景下观察到强烈的凝集物则为阳性。另外，请确认生理盐水是否发生自然凝集。

（3）分型凝集反应

若混合血清中出现一个反应为阳性，请按以下方法进行分型。

在Ⅰ/Ⅱ血清里呈现阳性的情况下，则用Ⅰ及Ⅳ血清，若在Ⅴ/Ⅵ血清里呈阳性的情况下，则用Ⅵ, Ⅵ, Ⅶ,  Ⅷ, Ⅸ血清，按上述一样的方法进行玻片凝集反应，用肉眼观察判定凝集的有无。

把反应呈阳性的血清名作为被检菌的O抗原因子。

2）H抗原的决定

H抗原的决定使用液体培养基运用试管内的凝集反应进行。

（1）培养

本菌的鞭毛数很少，为1-4根，为了得到良好的结果，通过半流动培养基来提高它的活性。

被检菌的培养通过克雷吉管里的BHI半流动培养基（琼脂浓度0.2w/v%）3～4次，在BHI液体培养基里接种，用30℃培养一个晚上。

（2）试剂的调制

用BHI培养基培养的菌液里加入等量的1vol%福尔马林和生理盐水作为抗原液使用。

（3）从小试管中用各容器附带的滴管吸取各H血清2滴，然后各加入0.5mL的抗原液。再用1支未加入血清的作为对照品。

（4）充分震荡混合，用50～52℃的温浴槽放置1小时，然后用肉眼观察判定有没有凝集。

判定的时候，由于H凝集容易破坏，所以请不要震荡试管，用肉眼来观察判定有没有凝集。

把反应呈阳性的血清名作为被检菌的H抗原因子。

【测定结果的判定法】

1.O分群试验

凝集的观察，透过台式萤光灯等光下用肉眼进行观察。最初，试验材料和生理盐水的反应会产生乳白色的均等的悬浮液，请确认悬浮液不凝集。和本品发生反应，1分钟内在透明的前景下观察到强烈的凝集物则为阳性，超过1分钟出现凝集或在乳白色背景下观察到细微的凝集块则为阴性。

2.H分型试验

凝集的观察，透过台式萤光灯等光下用肉眼进行观察。最初，试验材料和生理盐水的反应不会产生凝集。和各血清反应，出现绵状的凝集则为阳性，保持浮游液的则为阴性。

3.被检菌的血清型的决定

被检菌的血清型由O抗原因子的组合，H抗原因子的组合来决定。（请参照下表）

李斯特菌(L.monocytogenes)的抗原构造

【使用上及操作上的注意事项】

1.        操作上（防止危险）的注意事项

1）   由于本品是以感染性的备检物品作为对象，所以，备检物品的采集选取，试药的操作，试验材料及器具的废弃等各方面都要小心处理。请戴上护具（眼镜、手套、面具等）后，小心地进行操作。另外，李斯特菌是符合生物安全水平（BSL）2的病原体。

2）   试验里用到的被检物品、试验材料及试验材料所接触到的器具等，请作为感染性物品小心对待。

3）若本品不慎误入眼睛、口中，或附着在皮肤上，请用水充分冲洗干净，做一下应急处理。必要的时候请接受医生的治疗。

2.        使用上的注意事项

1）   请尽量避免把本制品进行冻结，并遵从保存法(2～10℃)来进行保存。若冻结的话，本品的性质会发生变化，得不到正确的结果，所以，请勿使用冻结了的本制品。另外，使用的时候，请在常温（15～25℃）下放置30分钟后再使用。

2）   请不要使用过期的试药。

3）   即使是同一制造号码，也请不要进行试剂之间的互相添加。

4）   请注意不要拿错试剂的瓶盖。

5）   本品只能使用从食品中分离出来的李斯特菌。

3.废弃上的注意事项

1）因在被检测标本中，可能存在带有感染性的物质，因此请根据如下的方法进行废弃液体、使用完的器具等等的灭菌处理。

（1）在最终浓度为3.5vol％的戊二酸醛溶液上进行30分钟以上的浸泡。

（2）在0.5w/v％的次氯酸钠溶液（有效氯5000ppm)中进行1小时以上的浸泡。

（3）在121℃中进行20分钟以上的高压蒸汽灭菌。

2）本制品是作为保存剂，含有0.08w/v％的叠氮化钠。叠氮化钠是指，由于铅管和铜管反应所产生出的爆发性强金属叠氮化物，所以在废弃的时候，请和大量的水一起流走。

3）在废弃试剂以及器具等等的时候，请遵从关于废弃品的处理以及打清扫的法律，防止水质污染法等等的规定来进行处理。

【储存方法·有效期】

存储的方法  保存于2～10℃

 有效期      1年

（请在标签以及箱外所显示的有效期内使用。）

中国总代理：  广州健仑生物科技有限公司
移动电话：  13802525278     杨永汉

公司电话：  020-82574011 （市场部）
腾讯 Q Q：  2042552662